NK供体筛选服务

基于FCGR3A 基因 p.F158V 多态性或ADCC活性的NK细胞供体筛选方案

在 NK 细胞治疗领域，尤其针对CAR-NK 细胞联合单克隆抗体的治疗方案，供体FCGR3A 基因 p.F158V 多态性是供体筛选的核心评价指标。该位点多态性直接决定NK细胞表面CD16 受体对 IgG 抗体 Fc 段的结合亲和力，进而显著影响抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）的效应强度。

方法	采用基因测序、qPCR或基于机器学习模型的流式细胞术等方法，筛选出携带高亲和力V等位基因的供体。利用不同靶点阳性药物对供体PBMC进行体外ADCC活性筛选，可根据研究需求筛选出高NK活性供体，用于抗体药物研发及NK细胞疗法的相关研究。
优点	基于FcγRIIIa F158V位点多态性或体外ADCC活性预筛的供体筛选，是一种精准医学筛选策略，可显著提升NK细胞介导对抗体依赖性抗肿瘤杀伤效能；能有效降低客户供体挑选的时间成本；依托丰富的供体资源库，能够充分满足客户的差异化筛选需求。
不足	若严格以FCGR3A p.F158V V/V 纯合子基因型或高 ADCC 活性作为筛选标准，供体筛中率通常较低，仅为10%左右。

部分数据展示

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图1、SK-BR-3作为靶细胞，PBMC作为免疫效应细胞，曲妥珠单抗（Trastuzumab）为阳性药物开展ADCC实验，结果显示曲妥珠单抗（Trastuzumab）对SK-BR-3细胞表现出显著的剂量依赖性细胞毒性（ADCC）效应，不同供体来源的PBMC作为效应细胞时，其杀伤作用存在明显差异。

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图2、Raji作为靶细胞，PBMC作为免疫效应细胞，利妥昔单抗（Rituximab）为阳性药物开展ADCC实验，结果显示利妥昔单抗（Rituximab）对Raji细胞表现出显著的剂量依赖性细胞毒性（ADCC）效应，不同供体来源的PBMC作为效应细胞时，其杀伤作用存在明显差异。

注：推荐活性窗口（span）≥30%的供体为优选供体

基于NK细胞在PBMC中起始比例的供体筛选方案

以外周血单个核细胞（PBMC）中 NK 细胞的初始占比为核心筛选指标，是 NK 细胞治疗供体预筛的高效、低成本策略。通过流式细胞术检测 NK 细胞特征性表型标志物，从供体库中筛选出 NK 细胞起始比例更高的优质供体，可保障 NK 细胞体外扩增的初始细胞基数，为后续高效扩增、提升细胞制品活性与纯度奠定基础，是 CAR-NK、NK 联合抗体治疗等研发场景中快速遴选理想供体的常用手段。

方法	通过流式细胞术表型分析，检测CD3-CD19-CD16+CD56+NKG2D+等NK细胞特征性标志物，从大规模供体库中筛选NK细胞占比优异的供体。
优点	能有效降低客户供体挑选的时间成本及筛选成本；依托丰富的供体资源库，能够充分满足客户的差异化筛选需求。
不足	高NK细胞比例的供体虽然具备更高的初始扩增细胞基数，但其在不同的扩增体系中的扩增能力存在差异，并非均能实现高效扩增；若采用冻存PBMC方式筛选，需对供体进行召回采集，改流程存在一定的不确定性；即使满足召回条件，供体不同时段的健康与生理状态差异，也可能导致重新采集的样本与原冻存样本的生物学特性存在偏差。

部分数据展示：

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图1.NK流式分析圈门策略

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表1.部分供体流式数据展示，推荐NK≥20%的供体为优选供体

基于NK扩增能力的供体筛选方案

以NK 细胞体外扩增能力为核心的供体筛选，通过对供体 PBMC 进行标准化 NK 细胞诱导扩增培养，直接评估细胞扩增倍率与纯度，是筛选优质 NK 供体最直观的方案。可精准锁定扩增能力强、细胞制品纯度高的理想供体，从源头保障 NK 细胞治疗的细胞产量与功能活性，为 CAR-NK 等细胞疗法的研发与制备提供高效的供体来源。

方法	对新鲜或冻存PBMC进行去T细胞预处理后，开展14天的NK细胞体外扩增培养，根据扩增纯度及扩增倍率选出优质供体；直接用新鲜或冻存PBMC为起始材料，开展14天的NK细胞体外扩增培养，根据扩增纯度及扩增倍率选出优质供体。
优点	直接进行NK细胞扩增预筛，可更直观、高效的挑选出优质供体；依托丰富的供体资源库，能够充分满足客户的差异化筛选需求。
不足	需依托体外细胞扩增培养，筛选周期较长、综合成本偏高。

部分数据展示

图1：流式表型分析PBMC起始的NK扩增

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图2：NK扩增培养14天后的明场照片

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图3：不同供者PBMC经NK细胞扩增培养14天，NK细胞纯度与扩增倍数对比

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